2 × Taq Platinum PCR Sib tov
Yam Ntxim Saib Ntxim Ua
1 chav (U) Taq Platinum DNA Polymerase kev ua haujlwm tau txhais tias yog cov enzyme xav tau los koom nrog 10 nmol deoxynucleotides rau hauv cov kua qaub-cov tshuaj tsis haum ntawm 74 ° C hauv 30 feeb siv cov kua qaub salmon phev DNA ua qauv/primer.
Tswjhwm
Kev huv los ntawm SDS-PAGE nrhiav tau ntau dua 99%; Tsis muaj kev ua haujlwm ntawm exogenous nuclease raug kuaj pom; Ib leeg-luam cov noob hauv tib neeg genome tuaj yeem ua kom muaj txiaj ntsig zoo; Tsis muaj kev hloov pauv tseem ceeb thaum khaws cia hauv chav sov li ib lub lim tiam.
Cov Txheej Txheem Tseem Ceeb
Nws muaj 5′-3 ′ exonuclease kev ua ub no thiab 3′-5 ′ exonuclease kev ua ub no, thiab nws qhov ncaj ncees nyob ib sab ntawm Pfu polymerase. Kev txuas ntxiv ntawm Taq Platinum Polymerase nrawm dua Pfu polymerase thiab kev ua kom muaj zog ntau dua. PCR cov khoom tuaj yeem txuas ncaj qha mus rau qhov kawg tsis meej lossis cloned nrog TA vector. Yog tias kev ua haujlwm cloning yuav tsum tau txhim kho, nws raug nquahu kom ntxuav ua ntej thiab ntxiv 3'-dA overhangs ua ntej cloning rau hauv TA vector.
Ib-raj Taq Platinum MasterMix (National High-Tech Product Certification)
■ Taq Platinum MasterMix tau txhim kho qhov tshwj xeeb thiab nkag siab zoo ntawm PCR cov tshuaj tiv thaiv thiab tuaj yeem nthuav cov qauv nyuaj nrog cov ntsiab lus GC siab, tus qauv thib ob thiab zoo li. Tsawg li 2 daim ntawv theej ntawm lub hom phiaj tuaj yeem nthuav dav, ua kom ntseeg tau cov txiaj ntsig sim tau zoo dua.
■ Qhov tshwj xeeb Taq Platinum MasterMix cov mis ua rau tag nrho cov txheej txheem tshuaj tiv thaiv ruaj khov, thiab cov haujlwm yuav tsis cuam tshuam los ntawm kev khov dua-thaw lossis khaws cia ntev ntawm 4 ° C.
■ Kev ruaj khov thiab muaj txiaj ntsig tau npaj ua ntej PCR sib xyaw ua ke tuaj yeem ua haujlwm sai thiab yooj yim, txo qis kev siv zog ntau thiab ua piv txwv yuam kev. Kev ua tau zoo PCR txhim kho thiab ua kom zoo dua kuj tau suav nrog hauv kev sib xyaw, uas txo qhov xav tau ntawm PCR cov xwm txheej.
Product Cov khoom no muaj ob qho tib si muaj cov xim tsis muaj xim thiab tsis muaj xim zas xim. Dye-บรรจุ MasterMix cov khoom tuaj yeem ncaj qha electrophoresed tom qab PCR, yam tsis ntxiv kev thauj khoom ntxiv.
Cov ntawv thov
Nws tuaj yeem hloov Pfu polymerase txhawm rau txhim kho cov khoom lag luam ncaj ncees los ntawm cov qauv nyuaj xws li genomes, thiab nws yog qhov tsim nyog rau kev siv xws li cloning ntawm kev qhia noob, kev hloov chaw tshwj xeeb thiab kev tshuaj xyuas ntawm ib leeg nucleotide polymorphism (SNP), thiab lwm yam.
Kev ceev faj hauv Kev Tsim Tus Qauv PCR:
Qhov ntev primer feem ntau yog 20-25 mer. Txawm li cas los xij, thaum ua ntu ntu PCR ntev, lub hauv paus ntev yuav tsum nce mus rau 30-35 mer.
■ Tsis muaj kev sib koom ua ke ntawm ob lub hauv paus, tshwj xeeb yog rau 3 lub hauv paus kawg ntawm 3 ′ kawg.
Content GC cov ntsiab lus yuav tsum yog 50-60%, thiab zam kev nplua nuj hauv zos GC lossis AT. Txhawm rau ua tus qauv thiab tus qauv khi ruaj khov, zam AT cov qauv nplua nuj ntawm 3 ′ kawg.
■ Tsis txhob siv cov primer los ua tus qauv thib ob.
■ Xaiv ob lub hauv paus nrog Tm kub ze rau ib leeg.
Xam ntawm Tm Tus Nqi ntawm Cov Thawj rau PCR:
■ Thaum lub hauv paus qis dua 20 mer: Tm = 2 ° C × (A+T)+4 ° C × (G+C).
■ Thaum primer ntau dua 20 mer: Tm = 81.5+0.41 × (GC%)-600/L, qhov twg L yog qhov ntev ntawm primer.
■ Teem qhov ntsuas kub ntawm (Tm-5) ° C.
PCR Primer Tswv Yim
Qhov tsim nyog zaum kawg ntawm cov primers tuaj yeem xaiv ntawm 0.1 μM thiab 1.0 μM. Qhov qis qis tshaj ntawm cov tshuaj ua rau ua rau qis qis ntawm cov khoom lag luam ua kom nrov nrov, thaum lub siab dhau mus rau cov qib primer ntau dua yog qhov tsis cuam tshuam tshwj xeeb. Feem ntau, thaum tus nqi ntawm cov qauv DNA loj lossis nyuaj ua qauv DNA (xws li tib neeg genome DNA) tau siv los ua tus qauv, cov qib primer yuav tsum qis dua. Thaum tus nqi ntawm cov qauv DNA me me lossis cov qauv yooj yim DNA (piv txwv li, plasmid DNA, thiab lwm yam) tau siv ua tus qauv, cov tshuaj primer yuav tsum siab dua.
Txhua yam khoom tuaj yeem tsim kho rau ODM/OEM. Yog xav paub ntxiv,thov nyem Customized Service (ODM/OEM)
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Siv cov genomic DNA ua tus qauv txhawm rau ua kom nrov dua 1 kb tawg tom qab PCR cov tshuaj tiv thaiv, siv 5 μl rau kev kuaj pom hluav taws xob. |
A-1 Tus Qauv
Template Tus qauv muaj cov protein tsis zoo los yog Taq inhibitors, thiab lwm yam —— Kho cov qauv DNA kom huv, tshem cov protein tsis huv lossis rho tawm cov qauv DNA nrog cov khoom siv ua kom huv.
■ Qhov tsis lees paub ntawm tus qauv tsis ua tiav - - Ua kom tsim nyog ua kom sov qhov denaturation thiab ua kom ntev lub sijhawm denaturation.
■ Template degradation —— Rov npaj tus qauv.
A-2 Tus Thawj Coj
■ Hmoov tsis zoo ntawm cov primers —— Rov ua dua tus txheej txheem.
■ Primer degradation ——Alquot cov qib siab ua kom zoo ua ntej ntim rau khaws cia. Zam ntau yam khov thiab ua kom sov lossis lub sijhawm ntev 4 ° C cryopreserved.
Design Kev tsim qauv tsis zoo ntawm cov primers (piv txwv li primer ntev tsis txaus, dimer tsim ntawm cov primers, thiab lwm yam) -Res txheej txheej txheej tshiab (zam kev tsim primer dimer thiab cov qauv thib ob)
A-3 mg mas2+siab
■ Mg os2+ cov ntsiab lus qis dhau —— Ua kom zoo ntxiv Mg2+ concentration: Ua kom zoo dua Mg2+ concentration los ntawm cov tshuaj tiv thaiv kab mob los ntawm 1 mM txog 3 mM nrog rau lub sijhawm 0.5 mM los txiav txim siab qhov pom zoo Mg2+ concentration rau txhua tus qauv thiab primer.
A-4 Kub kub
■ Qhov kub ua kom sov siab cuam tshuam rau kev khi ntawm primer thiab tus qauv. —— Txo qhov kub kom txias thiab ua kom zoo dua qub nrog qhov gradient ntawm 2 ° C.
A-5 ncua sijhawm
Time Lub sijhawm ncua luv luv —— Ua kom lub sijhawm txuas ntxiv.
Phenomena: Cov piv txwv tsis zoo kuj qhia txog cov phiaj sib law liag.
A-1 Kev sib kis ntawm PCR
■ Hla kev sib kis ntawm cov phiaj sib luag lossis cov khoom lag luam nthuav dav -— Ua zoo saib kom tsis txhob xa cov qauv uas muaj cov phiaj sib luag hauv cov qauv tsis zoo lossis ua rau lawv tawm ntawm lub raj centrifuge. Cov tshuaj reagents lossis cov cuab yeej siv yuav tsum tau autoclaved kom tshem tawm cov nucleic acids uas twb muaj lawm, thiab kev muaj kab mob sib kis yuav tsum raug txiav txim siab los ntawm kev sim tsis zoo.
■ Reagent paug ——Txhua cov tshuaj reagents thiab khaws cia ntawm qhov kub tsawg.
A-2 Thawjr
■ Mg os2+ cov ntsiab lus qis dhau —— Ua kom zoo ntxiv Mg2+ concentration: Ua kom zoo dua Mg2+ concentration los ntawm cov tshuaj tiv thaiv kab mob los ntawm 1 mM txog 3 mM nrog rau lub sijhawm 0.5 mM los txiav txim siab qhov pom zoo Mg2+ concentration rau txhua tus qauv thiab primer.
Design Kev tsim qauv tsis zoo, thiab lub hom phiaj ua ntu zus muaj homology nrog rau cov hom phiaj tsis sib xws. --- Re-design primers.
Phenomena: PCR kev sib txuas ua ke tsis sib xws nrog qhov xav tau me me, loj lossis me, lossis qee zaum ob qho tshwj xeeb ua kom muaj suab nrov thiab tsis tshwj xeeb tshwj xeeb ua haujlwm tau tshwm sim.
A-1 Tus Thawj Coj
■ Tsis zoo tshwj xeeb primer
--- Re-tsim primer.
Concentration Lub hauv paus ntsiab lus siab dhau - - Ua kom muaj qhov ntsuas kub tsis txaus thiab ua kom lub sijhawm tsis ua haujlwm ntev.
A-2 Mg2+ siab
■ The Mg2+ siab yog siab dhau —— Ua kom txo Mg2+ qhov ua tau zoo: Ua kom zoo dua Mg2+ concentration los ntawm cov tshuaj tiv thaiv kab mob los ntawm 1 mM txog 3 mM nrog rau lub sijhawm 0.5 mM los txiav txim siab qhov pom zoo Mg2+ concentration rau txhua tus qauv thiab primer.
A-3 Thermostable polymerase
Enzy Cov enzyme ntau npaum li cas —— Txo cov enzyme kom tsim nyog thaum sib nrug ntawm 0.5 U.
A-4 Kub kub
Temperature Qhov ntsuas qhov kub qis dhau--Ua kom tsim nyog kom sov qhov kub kom sov lossis txais yuav ob txoj hauv kev ua kom sov
A-5 PCR mus
Many Muaj ntau lub PCR mus los —— Txo cov naj npawb ntawm PCR mus.
A-1 Tus Thawj Coj—— Qhov tshwj xeeb tsis zoo —— Rov tsim tus primer, hloov txoj haujlwm thiab ntev ntawm tus primer los txhim kho nws qhov tshwj xeeb; lossis ua zes PCR.
A-2 Template DNA
—— Tus qauv tsis dawb huv —— Ua kom huv cov qauv lossis rho tawm DNA nrog cov khoom siv ua kom huv.
A-3 mg mas2+ siab
—— Mg2+ siab yog siab dhau —— Txo txo Mg2+ concentration: Ua kom zoo dua Mg2+ concentration los ntawm cov tshuaj tiv thaiv kab mob los ntawm 1 mM txog 3 mM nrog rau lub sijhawm 0.5 mM los txiav txim siab qhov pom zoo Mg2+ concentration rau txhua tus qauv thiab primer.
A-4 dNTP
——Qhov siab ntawm dNTPs siab dhau lawm —— Txo cov concentration ntawm dNTP kom tsim nyog
A-5 Kub kub
——Tau qhov kub kom txias tsawg heev —— Tsim nyog kom ua kom sov sov
A-6 Cycles
——Tej ntau txoj kev mus —— Ua kom zoo dua tus lej naj npawb
Thawj kauj ruam yog xaiv qhov tsim nyog polymerase. Taq polymerase tsis tu ncua tsis tuaj yeem txheeb xyuas tau vim tsis muaj 3'-5 'kev ua haujlwm tshwj xeeb, thiab kev tsis sib xws yuav txo qis kev ua haujlwm txuas ntxiv ntawm cov tawg. Yog li ntawd, Taq polymerase tsis tu ncua tsis tuaj yeem ua kom lub hom phiaj tawg ua haujlwm loj dua 5 kb. Taq polymerase nrog kev hloov kho tshwj xeeb lossis lwm yam kev ntseeg siab polymerase yuav tsum raug xaiv los txhim kho kev ua haujlwm txuas ntxiv thiab ua tau raws li qhov xav tau ntawm kev faib ua ntu ntu ntev. Ib qho ntxiv, kev nthuav dav ntawm cov ntu ntev kuj tseem xav tau kev hloov pauv ntawm cov qauv tsim ua ntej, lub sijhawm tsis sib xws, ncua sijhawm ntxiv, tsis pH, thiab lwm yam. Txhawm rau tiv thaiv tus qauv puas, lub sij hawm denaturation ntawm 94 ° C yuav tsum tau txo kom 30 sec los yog tsawg dua ib lub voj voog, thiab lub sijhawm kom kub kom txog 94 ° C ua ntej amplification yuav tsum tsawg dua 1 min. Ntxiv mus, teeb tsa qhov ntsuas kub ntxiv txog li 68 ° C thiab tsim lub sijhawm txuas ntxiv raws li tus nqi ntawm 1 kb/min tuaj yeem ua kom muaj txiaj ntsig zoo ntawm qhov tawg ntev.
Qhov ua yuam kev ntawm PCR kev nthuav dav tuaj yeem txo qis los ntawm kev siv ntau yam DNA polymerases nrog kev ncaj ncees siab. Ntawm tag nrho Taq DNA polymerases pom txog tam sim no, Pfu enzyme muaj qhov yuam kev qis tshaj thiab ua siab ncaj tshaj plaws (saib cov lus txuas nrog). Ntxiv nrog rau kev xaiv cov enzyme, cov kws tshawb fawb tuaj yeem txo qis PCR kev hloov pauv los ntawm kev ua kom zoo dua cov xwm txheej, suav nrog kev ua kom tsis muaj qhov tsis sib xws, kev ntsuas cov ntsuas cua sov polymerase thiab ua kom zoo dua PCR cov lej.
Pawg khoom
Vim Li Cas Xaiv Peb
Txij li nws tau tsim, peb lub Hoobkas tau tsim thawj cov khoom lag luam hauv ntiaj teb nrog ua raws txoj cai
zoo ua ntej. Peb cov khoom tau txais txiaj ntsig zoo hauv kev lag luam thiab muaj txiaj ntsig zoo ntawm cov neeg siv khoom qub thiab qub ..
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